维甲酸激活基因RA28编码蛋白的表达及性质研究

【摘要】目的：研究新基因RA28的读码框及其蛋白的性质，并检测其在不同肿瘤细胞系中的表达情况，探讨其与肿瘤发生的关系。方法：采用原核表达系统，获得高效表达，产物经金属螯合亲和层析纯化；Westernblot分析RA28蛋白在不同细胞系中的表达情况。此外，借助计算机辅助分析。结果：RA 28蛋白的分子量为12KDa，等电点为7.1；RA28蛋白在所检测的细胞系中均表达,未见细胞表达的特异性；同源序列比较表明，RA2 8与Mat8(Mammarytumor8KDa)有很高的同源性。结论：RA28可能参与细胞信号传导，并与肿瘤发生相关。

3讨论

　　RA28是我室用全反式维甲酸诱导肺腺癌细胞系GLC-82，用消减杂交方法分离得到的一个新cDNA。Mat-8基因最初是从人乳腺瘤细胞系克隆出来的，在转c-neu或c-Ha-ras的转基因动物的乳腺癌细胞中可检测到Mat-8的表达，而在转c-myc的转基因动物的乳腺癌细胞中检测不到Mat-8的表达，说明Mat-8的表达与肿瘤的发生有关[8]，而RA28与Mat-8有如此高的同源性，有理由推断RA28可能也与肿瘤的发生有关。为了进一步研究基因RA28的结构和功能，我们采用原核表达系统，获得高表达的重组子pET-22b(＋)-RA28，并对融合蛋白的理化性质如：分子量,等电点等进行了研究。Westernblot分析表明，RA28蛋白在所检测的肿瘤细胞系中都表达,未见细胞的特异性。此外,基因R A28及其编码蛋白定位工作也已完成[9]。
　　计算机分析表明：RA28蛋白具有一个酪蛋白激酶Ⅱ（cas einkinaseⅡ）磷酸化位点和四个酰基化(Nmyristoylation)位点。细胞信号传导的一个普通特征是，细胞外信号必须借助一定的方式渗入脂双层。近十年的研究表明，特异脂酸共价修饰或翻译后修饰的蛋白能直接穿过细胞膜，而N－酰基化修饰的蛋白对细胞的生长、发育、细胞信号传导及肿瘤发生起重要作用[10]。因此,我们推断RA28可能参与细胞信号传导，并与肿瘤发生相关。至于RA28确切的功能,尚需进一步实验证明。（骆爱萍　王光虎　刘芝华　王秀琴　吴旻癌症2000年9期）

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