癌症研究
ERβ表达载体的构建及其在肿瘤细胞中的功能研究
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摘 要：目的构建ERβ表达载体,探讨其在肿瘤细胞株中的表达及功能.方法利用常规PCR技术扩增人全长ERβ编码序列,并将其克隆到真核表达载体pCDNA3中,得到重组质粒pCDNA3-ERβ.用Western
blot和体外翻译方法检测ERβ的表达情况.将pCDNA3-ERβ分别转染SV40病毒转化的胚胎肾细胞293T、乳腺癌细胞MDA-MB-435、MDA-MB-436、SKBR3和前列腺癌细胞PC-3,用含雌激素应答元件的报告基因系统检测ERβ在这些不同细胞中的功能.结果经酶切鉴定,证实重组质粒pCDNA3-ERβ含有目的基因ERβ.Western
blot 检测表明,转染pCDNA3-ERβ的细胞表达了相对分子量为63 000的ERβ蛋白.体外翻译进一步证实该表达载体翻译了ERβ蛋白.报告基因系统检测表明,ERβ在不同肿瘤细胞中的表达均激活了雌激素应答的ERE和C3报告基因的表达.结论
pCDNA3-ERβ在肿瘤细胞中既可表达,又具有功能活性,为进一步研究ERβ在肿瘤细胞中的作用奠定了基础. 关键词：乳腺肿瘤; 受体,雌激素; 基因; 转染(朱建华 叶棋浓 江泽飞 钟红君 严景华 吕秋军 宋三泰 黄翠芬 中华肿瘤杂志2003年4期） |